เทคโนโลยีการแบ่งประเภทเซลล์เม็ดเลือดทั้งห้าเป็นการประยุกต์ใช้อย่างครอบคลุมในด้านทัศนศาสตร์ กลศาสตร์ กลศาสตร์ของไหล คอมพิวเตอร์อิเล็กทรอนิกส์ ชีววิทยาของเซลล์ ภูมิคุ้มกันวิทยา และสาขาวิชาอื่นๆ ช่วยให้สารละลายที่วัดได้ไหลผ่านพื้นที่การวัดและตรวจจับคุณสมบัติทางกายภาพและทางเคมีของแต่ละเซลล์ทีละเซลล์ วิธีการสำหรับการกำหนดและวิเคราะห์เชิงปริมาณอย่างรวดเร็วของเซลล์หรือเซลล์ย่อยที่ไหลด้วยความเร็วสูง สามารถวิเคราะห์เซลล์ได้หลายพันเซลล์ในหนึ่งวินาทีและวัดค่าพารามิเตอร์ต่างๆ ของเซลล์ได้พร้อมกัน วิธีอิมพีแดนซ์ยังใช้ในเครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยาห้าคลาส ซึ่งเรียกว่าวิธีอิมพีแดนซ์กระแสของปลอกหุ้ม
บนตัวนับเซลล์เม็ดเลือดทั่วไป เซลล์เม็ดเลือดแดง (RBC) และเกล็ดเลือด (PLT) จะใช้ช่องทางการตรวจวัดร่วมกัน และหลักการวัดปริมาณฮีโมโกลบิน (HGB) จะเหมือนกันในเครื่องมือทุกประเภทและทุกเกรด มีช่องทางเฉพาะสำหรับการนับและจำแนกเซลล์เม็ดเลือดขาว ตอนนี้เราจะแนะนำวิธีการทางเทคนิคและหลักการสั้นๆ ที่ใช้ในแต่ละรายการทดสอบบนเครื่องวิเคราะห์
1. การหาปริมาณเฮโมโกลบิน
การกำหนดปริมาณเฮโมโกลบินคือการเพิ่มสารทำให้เม็ดเลือดแดงแตกลงในเลือดที่เจือจางเพื่อปลดปล่อยฮีโมโกลบินออกจากเซลล์เม็ดเลือดแดง สารหลังรวมกับสารทำให้เม็ดเลือดแดงแตกเพื่อสร้างอนุพันธ์ของเฮโมโกลบิน ซึ่งเข้าสู่ระบบการทดสอบฮีโมโกลบินและเปรียบเทียบที่ความยาวคลื่นเฉพาะ (ปกติคือ 530-550 นาโนเมตร) การเปลี่ยนแปลงของสีและการดูดกลืนแสงเป็นสัดส่วนกับปริมาณ Hb ในของเหลว และเครื่องมือสามารถแสดงความเข้มข้นของ Hb ได้
เครื่องวิเคราะห์เลือดรุ่นต่างๆ มีสูตรที่แตกต่างกันสำหรับการสนับสนุนสารสร้างเม็ดเลือด และอนุพันธ์ของฮีโมโกลบินที่เกิดขึ้นก็ต่างกันด้วย แต่สเปกตรัมการดูดกลืนแสงสูงสุดส่วนใหญ่จะใกล้เคียงกับ 540 นาโนเมตร ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา เครื่องวิเคราะห์ระดับไฮเอนด์จำนวนมากได้นำวิธีการกระเจิงของแสงเลเซอร์มาใช้ในการวิเคราะห์ฮีโมโกลบินในเซลล์เม็ดเลือดแดงเดี่ยว เพื่อลดอิทธิพลของ WBC สูง ไคโลเมีย บิลิรูบินสูง ฯลฯ ที่มีต่อการวัดสี HBG
2. การตรวจหาเซลล์เม็ดเลือดแดงและเกล็ดเลือด
การตรวจหาเซลล์เม็ดเลือดแดงเป็นส่วนสำคัญของเครื่องวิเคราะห์เลือด ในอดีต การตรวจหาเซลล์เม็ดเลือดแดงส่วนใหญ่ใช้วิธีอิมพีแดนซ์ในการนับจำนวนและปริมาตรของเซลล์เม็ดเลือดแดงเพื่อแยกสัญญาณที่มีขนาดต่างกันและพิมพ์ฮิสโตแกรมการกระจายปริมาตรของเซลล์เม็ดเลือดแดง อย่างไรก็ตาม ขณะนี้มีการใช้การผสมผสานระหว่างทัศนศาสตร์และอิมพีแดนซ์ไฟฟ้าเพื่อทำการวิเคราะห์สามมิติ (3D) กับปริมาตรของเซลล์เม็ดเลือดแดงเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่แม่นยำยิ่งขึ้น
ตัวอย่างเช่น ADVIA 120 ของไบเออร์ใช้การกระเจิงของแสงเพื่อตรวจจับเซลล์เม็ดเลือดแดง และใช้การกระเจิงแสงไปข้างหน้าในมุมต่ำและการกระเจิงในมุมสูงสองระบบการวัดเพื่อวัดเซลล์เม็ดเลือดแดง 1 เซลล์พร้อมกัน และวัดปริมาตรและจำนวนรวมของ เซลล์เม็ดเลือดแดงเดียวตามขนาดของพลังงานการแปลงแสงมุมต่ำ การกระเจิงของแสงในมุมสูงสามารถรับความเข้มข้นของฮีโมโกลบินเดี่ยว ซึ่งสามารถรับ MCV (ปริมาตรเซลล์เม็ดเลือดแดงเฉลี่ย), MCH (ปริมาณเฮโมโกลบินเฉลี่ย), MCHC (ความเข้มข้นของเฮโมโกลบินเฉลี่ย) ได้อย่างถูกต้อง และวาดไดอะแกรมการกระจายเซลล์เม็ดเลือดแดง สีแดงเดี่ยว ปริมาณเซลล์เม็ดเลือดและเซลล์เม็ดเลือดแดง ฮิสโตแกรมของเนื้อหา Hb ภายในและคำนวณพารามิเตอร์ เช่น RWD (ความกว้างการกระจายปริมาตรเซลล์เม็ดเลือดแดง), HDW (ความกว้างการกระจายฮีโมโกลบินของเซลล์เม็ดเลือดแดง)
เนื่องจากความแตกต่างที่ชัดเจนของปริมาตรของเกล็ดเลือดและเซลล์เม็ดเลือดแดง จึงเป็นเรื่องง่ายที่จะแยกแยะสัญญาณโฟโตอิเล็กทริกที่วัดโดยทั้งสองอย่างพร้อมกันโดยมีขีดจำกัด ดังนั้น จนถึงปัจจุบัน ระบบการวิเคราะห์ทั่วไปจึงถูกนำมาใช้ในการตรวจเกล็ดเลือดและเซลล์เม็ดเลือดแดงในการวิเคราะห์เลือดครบส่วน อย่างไรก็ตาม สัญญาณการตรวจวัดของเกล็ดเลือดและเซลล์เม็ดเลือดแดงมักจะตัดกัน ตัวอย่างเช่น สัญญาณชีพจรของเกล็ดเลือดขนาดใหญ่อาจถูกเข้าใจผิดว่าเป็นเซลล์เม็ดเลือดแดงและนับ และสัญญาณชีพจรของเซลล์เม็ดเลือดแดงขนาดเล็กอาจเข้าสู่ช่องทางของเกล็ดเลือด ทำให้เกิดข้อผิดพลาดในการทดลอง ผู้ผลิตเครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยาหลายรายใช้เทคโนโลยีขั้นสูงที่หลากหลายเพื่อลดการรบกวนของการนับเกล็ดเลือด เช่น เทคโนโลยีการไหลแบบกวาด
เทคโนโลยี Sweep flow (sweep flow): เนื่องจากเกล็ดเลือดและเซลล์เม็ดเลือดแดงถูกนับในเซลล์การนับเดียวกัน เซลล์เม็ดเลือดแดงจึงมีขนาดใหญ่และจะสร้างชีพจรขนาดใหญ่เมื่อผ่านโซนเหนี่ยวนำการนับส่วนกลาง หากมีการไหลย้อนกลับก็จะสร้างการกลับเข้ามาใหม่ด้วยเนื่องจากกระแสไหลวน พัลส์ขนาดเล็กที่เกิดขึ้นที่ขอบของพื้นที่การตรวจจับทำให้อิเล็กโทรดสามารถตรวจจับชีพจรขนาดเล็กที่เทียบเท่ากับขนาดของเกล็ดเลือดซึ่งจะเพิ่มขึ้นอย่างผิดพลาด จำนวนเกล็ดเลือด เทคโนโลยี Sweep flow คือ การนับเม็ดเลือดแดงและเกล็ดเลือดพร้อมกัน มีของเหลวไหลคงที่หลังรูนับเซลล์เม็ดเลือดแดง เพื่อให้เซลล์เม็ดเลือดแดงถูกชะล้างออกไปทันที เพื่อป้องกันมิให้กลับเข้าสู่บริเวณเหนี่ยวนำให้เกิด นับเป็นเกล็ดเลือด