ในกรณีของการตั้งค่าความยาวคลื่นคู่ แสงของสารรบกวนโดยทั่วไปมีการกระเจิงของแสงและการดูดกลืนแสงที่ไม่เฉพาะเจาะจง ดังนั้นจึงจำเป็นต้องกำหนดความยาวคลื่นหลักและความยาวคลื่นย่อย และความยาวคลื่นหลักคือค่าสูงสุดของการดูดกลืนแสงเฉพาะของ สารที่จะทดสอบ หลักการของการตั้งค่าความยาวคลื่นย่อยคือการดูดกลืนสารรบกวนที่ความยาวคลื่นหลักใกล้เคียงกับการดูดกลืนแสงของความยาวคลื่นย่อยมากที่สุด การดูดซึมสูงสุดเท่าเดิม จึงสามารถขจัดการรบกวนของฮีโมโกลบินได้ ดังนั้น ยิ่งความยาวคลื่นปฐมภูมิและความยาวคลื่นทุติยภูมิใกล้เคียงกันมากเท่าใดก็ยิ่งดี
ข้อกำหนดในการวัด
1. ตัวอย่าง: เซรั่ม ปัสสาวะ น้ำไขสันหลัง ฯลฯ
2. รีเอเจนต์: รีเอเจนต์เดี่ยว, รีเอเจนต์คู่
3. ความยาวคลื่นคู่: ความยาวคลื่นสองช่วงประกอบด้วยความยาวคลื่นหลักและความยาวคลื่นย่อย สามารถขจัดการรบกวนในกระบวนการตรวจจับได้
4. เครื่องสอบเทียบ (มาตรฐาน): เปรียบเทียบความเข้มข้นของตัวอย่างที่ไม่รู้จัก
5. วัสดุควบคุมคุณภาพ: ใช้สำหรับตรวจสอบสถานะของเครื่องมือ รีเอเจนต์ ฯลฯ ในการทำงานประจำวันของเครื่องมือทางชีวเคมี
กระบวนการ
1. วิธีการสิ้นสุด (endessay) จะถูกแปลงเป็นผลิตภัณฑ์โดยสมบูรณ์ และจะไม่ทำปฏิกิริยาเพื่อไปยังจุดสิ้นสุดอีกต่อไป และใช้ค่าการดูดกลืนแสงของจุดสิ้นสุดของปฏิกิริยาเพื่อคำนวณความเข้มข้นของสารที่ทดสอบ ในการทดสอบทางชีวเคมี ยกเว้นเอนไซม์ BUN และ CRE จะใช้วิธีจุดปลายในการตรวจหา
1). วิธีจุดสิ้นสุดจุดเดียว: หาค่าการดูดกลืนแสงของจุดเมื่อปฏิกิริยาถึงจุดสิ้นสุดเพื่อคำนวณผลลัพธ์
2). วิธีจุดสิ้นสุดแบบสองจุด: หาค่าการดูดกลืนแสงของจุดหนึ่งก่อนปฏิกิริยาเริ่มต้น จากนั้นจึงนำค่าการดูดกลืนแสงของจุดที่สองเมื่อปฏิกิริยาไปถึงจุดสิ้นสุด คำนวณผลลัพธ์โดยการลบการดูดกลืนแสงที่จุดที่สอง ลบการดูดกลืนแสงที่จุดแรก ส่วนใหญ่ใช้ในการลบรีเอเจนต์และช่องว่างของตัวอย่าง รับประกันความถูกต้องของผลลัพธ์ โดยทั่วไปใช้สำหรับรีเอเจนต์คู่
2. วิธีเวลาคงที่ (วิธีสองจุด): เป็นการเอาความแตกต่างระหว่างจุดสองจุดที่ยังคงอยู่ในปฏิกิริยาเพื่อคำนวณผลลัพธ์ สองจุดนี้ไม่ใช่จุดเริ่มต้นหรือจุดสิ้นสุดของปฏิกิริยา ส่วนใหญ่ใช้เพื่อตรวจหารายการที่ไม่เฉพาะเจาะจงบางอย่าง เช่น ครีเอตินีน
3. วิธีการตรวจสอบอย่างต่อเนื่อง (วิธีจลนศาสตร์ วิธีอัตรา): เมื่อวัดกิจกรรมของเอนไซม์หรือเมแทบอไลต์ของเอนไซม์ ค่าการดูดกลืนแสง (△; A/นาที) ที่เปลี่ยนแปลงเป็นเส้นตรงในกราฟปฏิกิริยาจะถูกนำมาคำนวณผลลัพธ์อย่างต่อเนื่อง เรียกอีกอย่างว่าปฏิกิริยาลำดับศูนย์เนื่องจากความแตกต่างของการดูดกลืนแสงระหว่างจุดนั้นเป็นศูนย์ในช่วงเวลาของปฏิกิริยาเชิงเส้น